TGFβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400496

概要

TGFB2は、分泌性サイトカインであるトランスフォーミング増殖因子β2（TGFβ2）をコードします。TGFβ2はTGF-β受容体セリン／スレオニンキナーゼを介してシグナルを伝達し、SMAD2/3依存的な転写を活性化するとともに、MAPK、PI3K/AKT、Rho様GTPアーゼといった非カノニカル経路とも交差します。TGFβ2は、細胞外マトリックスのリモデリング、上皮間葉転換（EMT）、免疫調節、ならびに発生や組織恒常性における細胞運命決定の重要な制御因子です。TGFB2シグナルの異常は、線維化、創傷治癒の異常、腫瘍—間質相互作用と関連づけられており、微小環境に駆動される表現型の研究において重要です。ヒト細胞モデルでは、TGFB2を摂動することで、TGF-β経路のダイナミクスや下流の遺伝子制御プログラムの機構解析が可能になります。

TGFβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTGFB2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TGFB2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TGFB2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TGFβ2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TGFβ2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TGFB2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TGFβ2の機能に不可欠なTGFB2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TGFB2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TGFβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTGFβ2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TGFB2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TGFβ2 HDRプラスミド（h）および TGFβ2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTGFB2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTGFB2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。