TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400496

Übersicht

TGFB2 kodiert den Transforming Growth Factor Beta 2 (TGFβ2), ein sekretiertes Zytokin, das über Serin/Threonin-Kinasen der TGF-β-Rezeptoren signalisiert, um eine SMAD2/3-abhängige Transkription zu aktivieren, und dabei mit nicht-kanonischen Signalwegen wie MAPK, PI3K/AKT und Rho-ähnlichen GTPasen interagiert. TGFβ2 ist ein zentraler Regulator des Umbaus der extrazellulären Matrix, der epithelial-mesenchymalen Transition, der Immunmodulation sowie von Zellschicksalsentscheidungen während der Entwicklung und der Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte TGFB2-Signalgebung wurde mit Fibrose, gestörter Wundheilung und Tumor–Stroma-Interaktionen in Verbindung gebracht und ist daher für Studien zu durch das Mikromilieu getriebenen Phänotypen relevant. In humanen Zellmodellen ermöglicht die Perturbation von TGFB2 eine mechanistische Analyse der Dynamik des TGF-β-Signalwegs und nachgeschalteter genregulatorischer Programme.

Das TGFβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TGFB2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TGFB2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TGFB2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TGFβ2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TGFB2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TGFβ2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TGFB2-Exone abzielen, die für die TGFβ2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TGFB2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TGFβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TGFβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TGFB2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TGFβ2 HDR-Plasmid (h) und TGFβ2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TGFB2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TGFB2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.