TET3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414997-ACT

O TET3 humano codifica uma dioxigenase dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que catalisa a oxidação iterativa da 5-metilcitosina em 5-hidroximetilcitosina e em bases oxidadas subsequentes, apoiando a desmetilação ativa e passiva do DNA. Por meio dessa atividade de edição epigenética, o TET3 regula programas transcricionais envolvidos no remodelamento da cromatina, na especificação de linhagens e nas respostas ao estresse celular. A função do TET3 se cruza com processos de desmetilação acoplados ao reparo do DNA e com vias mais amplas de manutenção do estado da cromatina que moldam a identidade celular. A atividade desregulada do TET3 e padrões alterados de 5hmC têm sido associados a fenótipos do desenvolvimento e neurológicos e são frequentemente estudados no contexto da instabilidade epigenética na biologia do câncer.

TET3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TET3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TET3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TET3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TET3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TET3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TET3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TET3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TET3 em células tumorais com expressão de TET3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.