TERT Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423341-LAC

Il gene Tert del topo codifica la telomerasi reverse transcriptase (TERT), la subunità catalitica della telomerasi che sintetizza ripetizioni di DNA telomerico per mantenere l’integrità delle estremità cromosomiche durante la divisione cellulare. L’attività di TERT sostiene la capacità replicativa e influenza la stabilità del genoma limitando l’accorciamento dei telomeri, con effetti sulla senescenza cellulare, sull’auto-rinnovamento delle cellule staminali e sul potenziale proliferativo. Oltre all’allungamento dei telomeri, TERT è stata associata alle risposte al danno al DNA e a programmi trascrizionali che si interfacciano con la regolazione del ciclo cellulare e con la segnalazione dello stress. Un’alterata biologia della telomerasi è ampiamente rilevante nei modelli di invecchiamento, rigenerazione tissutale e trasformazione oncogena, in cui il mantenimento dei telomeri e la stabilità cromosomica sono determinanti chiave del fenotipo.

Le particelle di attivazione lentivirale TERT (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tert in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TERT (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tert, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TERT. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tert e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.