Plasmide CRISPR/Cas9 KO TERT (m): sc-423341
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TERT Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TERT, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TERT Antibody (C-12): sc-377511
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TERT (m) | sc-423341 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tert code la sous-unité catalytique de la télomérase (TERT), une transcriptase inverse qui allonge les répétitions télomériques afin de préserver les extrémités des chromosomes lors de la réplication de l’ADN. En maintenant la longueur des télomères, TERT soutient la capacité proliférative à long terme et influence la stabilité du génome, la sénescence réplicative et les réponses cellulaires au stress. L’activité de TERT s’articule avec la signalisation des dommages à l’ADN et les voies de protection des télomères, notamment le coiffage des extrémités assuré par le complexe shelterin et la régulation des points de contrôle. Une fonction de la télomérase dérégulée est pertinente pour les phénotypes associés au vieillissement, la biologie des cellules souches et les modèles de tumorigenèse, où le maintien des télomères influe sur l’instabilité chromosomique et le destin cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TERT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tert dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tert, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TERT.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tert pour l'étude de la signalisation de TERT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tert essentiels à la fonction de TERT
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tert pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TERT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TERT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tert. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TERT plasmide HDR (m) et le TERT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tert pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tert définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.