Plasmide CRISPR d'Activation (h) Telethonin: sc-402317-ACT

TCAP code la téléthonine, une protéine sarcomérique du disque Z qui se lie à l’extrémité N‑terminale de la titine (TTN) et contribue à stabiliser l’assemblage des myofibrilles ainsi que le couplage mécanique dans le muscle strié. La téléthonine participe à l’intégrité du sarcomère et à la signalisation associée à la mécanotransduction, en coordonnant l’organisation des complexes protéiques au niveau du disque Z durant le développement musculaire et l’adaptation. Des perturbations de l’expression de TCAP ou de la fonction de la téléthonine ont été associées à des cardiomyopathies héréditaires et à des affections du muscle squelettique, reflétant la sensibilité de l’architecture contractile à la stœchiométrie des protéines du disque Z. En tant que nœud au sein d’assemblages centrés sur la titine, la téléthonine est fréquemment étudiée dans des voies impliquées dans l’organisation du cytosquelette, le maintien des fibres musculaires et le remodelage en réponse au stress.

Telethonin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TCAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Telethonin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TCAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TCAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Telethonin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TCAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Telethonin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Telethonin dans les cellules tumorales présentant une expression de TCAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.