TDG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423321
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TDG O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TDG, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TDG Anticorpo (D-11): sc-376652
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TDG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423321 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A TDG (timina DNA glicosilase) de camundongo é uma enzima de reparo por excisão de bases que reconhece e remove timina ou uracila pareadas incorretamente com guanina, ajudando a resolver incompatibilidades G:T decorrentes de desaminação e erros de replicação. A TDG também participa da desmetilação ativa do DNA ao processar derivados oxidados de 5-metilcitosina gerados por enzimas TET, conectando-a à regulação epigenética e ao controle transcricional associado à cromatina. Por meio dessas atividades, a TDG contribui para a estabilidade do genoma, a manutenção de padrões de metilação do DNA e as respostas celulares a danos no DNA. Alterações na função da TDG têm sido associadas a estados epigenéticos desregulados e a processos mutacionais relevantes para estudos de biologia do câncer, programas de desenvolvimento e manutenção do genoma relacionada à inflamação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TDG (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tdg em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tdg, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tdg na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TDG.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tdg para a investigação da sinalização de TDG, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tdg críticos para a função TDG
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tdg para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TDG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TDG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tdg. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TDG Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TDG (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tdg para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tdg definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.