TDAG8 Plasmide Double Nickase (h): sc-416613-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TDAG8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TDAG8 Double Nickase Plasmid (h) e il TDAG8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR65. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TDAG8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416613-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TDAG8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416613-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GPR65** codifica **TDAG8**, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) sensibile ai protoni, arricchito in contesti immunitari ed ematopoietici, che si accoppia principalmente a **Gs** e alla segnalazione mediata da **cAMP** in risposta all’acidosi extracellulare. TDAG8 integra segnali dipendenti dal pH nei microambienti infiammatori, influenzando l’attivazione dei leucociti, i programmi citochinici e le decisioni di sopravvivenza cellulare, e interseca vie più ampie guidate dai GPCR che modulano le risposte **MAPK** e trascrizionali. L’alterata regolazione di **GPR65** è stata studiata in condizioni caratterizzate da acidosi tissutale e segnalazione immunitaria deregolata, inclusi contesti infiammatori e autoimmuni, nonché nella biologia del microambiente tumorale. Queste caratteristiche rendono TDAG8 un utile punto di accesso per studiare come il pH extracellulare rimodelli le reti di segnalazione e il comportamento delle cellule immunitarie.
TDAG8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR65 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR65. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR65. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR65 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.