Plasmide Double Nickase (h) TAZ: sc-400320-NIC

WWTR1 code le coactivateur transcriptionnel TAZ (TAZ/WWTR1), un effecteur clé en aval de la voie de signalisation Hippo, qui intègre les signaux mécaniques, la polarité cellulaire et les entrées des GPCR afin de réguler des programmes d'expression génique contrôlant la prolifération, la survie, la différenciation et la plasticité épithélio-mésenchymateuse. TAZ navette entre le cytoplasme et le noyau en réponse à la phosphorylation médiée par LATS1/2, en s'associant aux facteurs de transcription de la famille TEAD pour moduler des cibles impliquées dans la croissance tissulaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une activité de TAZ dérégulée a été liée à une inhibition de contact altérée et à des états transcriptionnels aberrants de type « cellules souches », faisant de WWTR1 un nœud fréquemment étudié en biologie du cancer, dans la signalisation associée à la fibrose et dans le développement des organes. Son dialogue avec les voies Wnt/β-caténine, TGF-β/SMAD et de mécanotransduction renforce encore sa pertinence pour analyser un contrôle transcriptionnel dépendant du contexte.

TAZ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WWTR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WWTR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WWTR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WWTR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.