TAUT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402918-ACT

SLC6A6 codifica o transportador humano de taurina TAUT, um transportador de membrana dependente de sódio e cloreto que medeia a captação de taurina de alta afinidade para manter os estoques intracelulares de taurina. A taurina contribui para a osmorregulação, a estabilização de membranas, a homeostase do cálcio e o equilíbrio redox, associando a atividade do TAUT à adaptação ao estresse celular, à função mitocondrial e à regulação da apoptose. Alterações na expressão de SLC6A6/TAUT ou na capacidade de transporte de taurina têm sido associadas a vulnerabilidade tecido-específica em sistemas excitáveis, incluindo retina, coração e sistema nervoso, e são estudadas em contextos de estresse metabólico e neurodegeneração. Como a disponibilidade de taurina influencia a sinalização inflamatória e a proteostase, o SLC6A6 é frequentemente investigado em modelos de vias relacionados a lesão oxidativa e disfunção mitocondrial.

TAUT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC6A6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAUT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC6A6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC6A6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAUT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC6A6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAUT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAUT em células tumorais com expressão de SLC6A6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.