TARC CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401905-ACT

CCL17 kodiert das Thymus- und aktivierungsregulierte Chemokin (TARC), ein sezerniertes CC-Chemokin, das die gerichtete Migration von CCR4-exprimierenden T-Zellen, einschließlich Th2-polarisierter Subtypen, zu Entzündungsherden fördert. Indem TARC den Leukozytenverkehr sowie die Kommunikation zwischen dendritischen Zellen und T-Zellen mitprägt, trägt es zur Positionierung von Immunzellen im Gewebe und zur Koordination zytokingesteuerter Antworten innerhalb des Chemokin-Signalnetzwerks bei. Eine fehlregulierte CCL17/TARC-Expression wird häufig bei allergischen Entzündungen und anderen immunvermittelten Pathologien untersucht, bei denen veränderte chemotaktische Gradienten die Immunzellinfiltration und den Gewebeumbau beeinflussen. In humanen Modellsystemen dient CCL17 als gut messbarer Readout für die Aktivierung inflammatorischer Schaltkreise und als Ansatzpunkt zur Untersuchung des Verhaltens von Chemokin-Rezeptor-Achsen.

TARC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCL17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TARC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCL17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCL17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TARC-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCL17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TARC-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TARC-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCL17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.