TAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424683

概要

マウスNxf1は、保存性の高いRNA結合性の輸送受容体であるTAPをコードしており、NXT1と協働して核膜孔複合体を介した核から細胞質へのmRNAの大量輸送を担います。TAPは、TREXなどのアダプター複合体との相互作用を通じて成熟メッセンジャーRNP（mRNP）を認識し、転写、スプライシング、3′末端プロセシングと核外輸送のカップリングにも寄与します。翻訳に利用可能な転写産物の供給を制御することで、Nxf1はプロテオスタシス、細胞周期の進行、ストレス応答性の遺伝子発現プログラムに影響を与えます。mRNA輸送機構の破綻は、がんにおける遺伝子発現異常や、神経発生・神経変性疾患の病態機序と関連づけられており、Nxf1はRNA代謝関連の病態を研究するうえで有用な結節点となります。

TAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNxf1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nxf1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nxf1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nxf1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TAPの機能に不可欠なNxf1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nxf1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nxf1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TAP HDRプラスミド（m）および TAP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNxf1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNxf1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。