Tak1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-424044-LAC-2

O gene murino Map3k7 codifica a TAK1 (TGF-β–activated kinase 1), uma MAP3K que integra sinais de receptores de TGF-β/BMP, de membros da superfamília do receptor de TNF, de receptores do tipo Toll e de complexos do receptor de IL-1 para ativar, a jusante, as cascatas de NF-κB e de MAPKs (JNK, p38 e ERK). Por meio da fosforilação de MAP2Ks e do complexo IKK via adaptadores TAB, a TAK1 regula a sinalização inflamatória e da imunidade inata, respostas ao estresse, decisões de apoptose/sobrevivência e a homeostase tecidual em múltiplos tipos celulares. A desregulação da sinalização de TAK1 está associada à produção aberrante de citocinas, ao comprometimento da integridade de barreiras e a remodelamento patológico em modelos de doenças inflamatórias, autoimunidade e redes de sinalização associadas ao câncer. A edição gênica direcionada a Map3k7 permite a dissecação mecanística da sinalização proximal aos receptores, do crosstalk entre vias e de fenótipos específicos por tipo celular, usando abordagens de knockout/knockin, marcação com epítopo ou perturbação do domínio quinase em células murinas e em sistemas in vivo.

As Partículas de Ativação Lentivirais Tak1 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Map3k7 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Tak1 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Map3k7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Tak1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Map3k7 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.