Plasmide CRISPR/Cas9 KO TAF II p250 (m): sc-435426

Présentation

Taf1 code pour TAF II p250 (TAF1), une sous-unité centrale du complexe TFIID, qui initie l’assemblage du complexe de pré-initiation de l’ARN polymérase II et relie la reconnaissance des promoteurs au niveau de transcription obtenu. En tant que régulateur multifonctionnel doté d’activités kinase et acétyltransférase, TAF1 influence l’organisation de la chromatine, l’initiation de la transcription et des programmes d’expression génique liés au cycle cellulaire. Dans les systèmes murins, le contrôle transcriptionnel dépendant de Taf1 est essentiel au développement embryonnaire, à la régulation des gènes neuronaux et aux voies de protéostasie qui façonnent les réponses cellulaires au stress. Une dérégulation de TAF1 et de la transcription médiée par TFIID a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des perturbations plus larges de l’homéostasie de l’expression génique, pertinentes pour la modélisation des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TAF II p250 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Taf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Taf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Taf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TAF II p250.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Taf1 pour l'étude de la signalisation de TAF II p250, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Taf1 essentiels à la fonction de TAF II p250
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Taf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TAF II p250 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TAF II p250 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Taf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TAF II p250 plasmide HDR (m) et le TAF II p250 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Taf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Taf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.