T2R38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402279

概要

TAS2R38は苦味受容体T2R38をコードしており、T2R38はPTC/PROPなどのチオ尿素含有化合物を検知するクラスA GPCRである。T2R38はガストデューシン関連シグナル伝達と共役し、化学感覚細胞におけるCa²⁺フラックスを含む細胞内セカンドメッセンジャーを調節する。口腔での味覚認知にとどまらず、T2R38は口腔外の上皮にも発現しており、苦味受容体シグナルは化学感覚による監視や上皮応答の制御に寄与する。一般的なTAS2R38ハプロタイプは受容体感受性を変化させ、苦味知覚の遺伝的決定因子、ならびに化学感覚に駆動される行動の個人差の要因として研究されてきた。GPCRに連結した感覚受容体として、T2R38はヒト細胞系における受容体シグナル伝達、発現制御、遺伝子型—表現型関係を解析するための扱いやすいモデルとなる。

T2R38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTAS2R38遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TAS2R38内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TAS2R38のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、T2R38タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、T2R38シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TAS2R38欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• T2R38の機能に不可欠なTAS2R38エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TAS2R38ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• T2R38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびT2R38 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TAS2R38遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  T2R38 HDRプラスミド（h）および T2R38 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTAS2R38ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTAS2R38標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。