Synoviolin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403476-ACT

O SYVN1 humano codifica a sinoviolina, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING residente no retículo endoplasmático (RE) que promove o controle de qualidade proteica por meio da degradação associada ao RE (ERAD). A sinoviolina catalisa a ubiquitinação de substratos mal dobrados ou regulatórios, sustentando a proteostase, modulando a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas e influenciando vias inflamatórias e de adaptação ao estresse. Ao regular a estabilidade de intermediários-chave de sinalização e dobramento, o SYVN1 conecta o estresse do RE à resistência à apoptose, a respostas impulsionadas por citocinas e à homeostase metabólica. A atividade desregulada de SYVN1 tem sido associada a fenótipos inflamatórios crônicos e a programas aberrantes de sobrevivência celular, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do acoplamento entre estresse do RE e inflamação.

Synoviolin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYVN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synoviolin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYVN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYVN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synoviolin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYVN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synoviolin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synoviolin em células tumorais com expressão de SYVN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.