SVCT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403006-ACT

SLC23A1 codifica o transportador humano de vitamina C 1 dependente de sódio (SVCT1), um simportador da membrana plasmática que medeia a captação de alta capacidade de L-ascorbato acoplada a gradientes de sódio. A atividade do SVCT1 sustenta a homeostase redox celular ao manter reservas intracelulares de ascorbato que influenciam a defesa antioxidante, a hidroxilação do colagénio e a regulação epigenética dependente de dioxigenases. Em tecidos epiteliais como o intestino e o rim, o SVCT1 contribui para a absorção alimentar e a reabsorção renal da vitamina C, moldando a disponibilidade sistémica de ascorbato. Alterações na função ou na expressão de SLC23A1 têm sido investigadas em contextos de suscetibilidade ao stress oxidativo e de fenótipos metabólicos e inflamatórios, nos quais o transporte de vitamina C pode modular vias de sinalização de resposta ao stress.

SVCT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC23A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SVCT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC23A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC23A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SVCT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC23A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SVCT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SVCT1 em células tumorais com expressão de SLC23A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.