SUV420H2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404626

Panoramica

KMT5C codifica la metiltransferasi della lisina SUV420H2, un enzima che modifica la cromatina e catalizza la trimetilazione della lisina 20 dell’istone H4 (H4K20me3). Questo marcatore è arricchito nell’eterocromatina e favorisce la compattazione della cromatina a ordine superiore, il controllo della tempistica di replicazione e il mantenimento della stabilità del genoma tramite la regolazione della scelta delle vie di riparazione del DNA. L’attività di SUV420H2 interagisce con i programmi di silenziamento epigenetico e con il rimodellamento della cromatina legato al ciclo cellulare, influenzando la repressione trascrizionale di elementi ripetitivi e di loci specifici di linea cellulare. La deregolazione dei pattern di metilazione di H4K20 e l’alterata espressione di SUV420H2 sono state associate a stati cromatinici aberranti osservati nel cancro e in altri contesti di instabilità genomica, rendendo KMT5C un nodo utile per studi meccanicistici incentrati sull’epigenetica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUV420H2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KMT5C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KMT5C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KMT5C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUV420H2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KMT5C per lo studio della segnalazione di SUV420H2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KMT5C critici per la funzione di SUV420H2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KMT5C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUV420H2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SUV420H2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KMT5C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUV420H2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SUV420H2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KMT5C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KMT5C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.