Plasmide CRISPR d'Activation (h) SULT1A3/1A4: sc-417169-ACT

SULT1A4 code une sulfotransférase cytosolique qui, avec l’isoforme SULT1A3 hautement homologue, catalyse la conjugaison au sulfate des catécholamines et d’autres substrats phénoliques, augmentant leur solubilité et modulant leur biodisponibilité. L’activité SULT1A3/1A4 s’intègre au métabolisme de phase II des xénobiotiques et à l’homéostasie des neurotransmetteurs, façonnant les réponses cellulaires au stress oxydatif et à l’exposition à des agents chimiques. Dans les tissus à fort renouvellement des catécholamines, une expression altérée peut influencer la prise en charge des monoamines et la signalisation en aval, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte des différences interindividuelles de métabolisme des médicaments et de sensibilité aux substances chimiques. Comme SULT1A3 et SULT1A4 partagent une forte similarité de séquence et des profils de substrats qui se recoupent, ce locus est également utilisé pour étudier la régulation spécifique des isoformes et les mécanismes de compensation au sein des voies de sulfoconjugaison.

SULT1A3/1A4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SULT1A4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SULT1A3/1A4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SULT1A4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SULT1A4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SULT1A3/1A4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SULT1A4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SULT1A3/1A4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SULT1A3/1A4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SULT1A4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.