Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUCLA2 (m): sc-423214

Présentation

Sucla2 code la sous-unité bêta murine SUCLA2 de la succinyl‑CoA synthétase (formant l’ADP), une enzyme de la matrice mitochondriale qui catalyse la conversion réversible du succinyl‑CoA en succinate avec production d’ATP dans le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle TCA). Par cette réaction, SUCLA2 soutient le métabolisme oxydatif, le flux anaplérotique et la coordination entre le cycle TCA et l’utilisation du succinyl‑CoA liée à l’hème et aux corps cétoniques. La fonction de SUCLA2 est étroitement liée à l’homéostasie énergétique mitochondriale et à l’équilibre des nucléotides, et la perturbation de cette voie est associée à des phénotypes d’encéphalomyopathie mitochondriale et à des défauts de maintien de l’ADNmt décrits dans les troubles mitochondriaux liés à SUCLA2. Dans les modèles murins, Sucla2 est donc pertinent pour étudier les réponses au stress métabolique, la vulnérabilité neuromusculaire et les mécanismes reliant les enzymes du cycle TCA à la stabilité du génome mitochondrial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUCLA2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sucla2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sucla2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sucla2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUCLA2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sucla2 pour l'étude de la signalisation de SUCLA2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sucla2 essentiels à la fonction de SUCLA2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sucla2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUCLA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SUCLA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sucla2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUCLA2 plasmide HDR (m) et le SUCLA2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sucla2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sucla2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.