Strumpellin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402808

Descripción general

WASHC5 codifica la strumpellina, un componente central esencial del complejo WASH que regula la polimerización de actina dependiente de Arp2/3 en las membranas endosomales. Mediante la coordinación de la tubulación y la fisión endosomal, la strumpellina favorece la clasificación y el reciclaje de cargas asociados al retrómero, influyendo en el tráfico de receptores de membrana y transportadores de nutrientes. La actividad de WASHC5 integra la remodelación del citoesqueleto con las rutas de endosoma a membrana plasmática y de endosoma a Golgi, modulando la migración celular, la salida de señalización y la homeostasis lisosomal. Las variantes patogénicas en WASHC5 se han vinculado a fenotipos neurodegenerativos, incluida la paraplejía espástica hereditaria, lo que subraya su relevancia para estudios sobre el mantenimiento neuronal y el estrés del tráfico de membranas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Strumpellin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WASHC5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WASHC5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WASHC5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Strumpellin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WASHC5 para la investigación de la señalización de Strumpellin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WASHC5 críticos para la función de Strumpellin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WASHC5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Strumpellin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Strumpellin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WASHC5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Strumpellin (h) y el plásmido HDR Strumpellin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WASHC5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WASHC5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.