Stim2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403491-ACT

STIM2 (molécula de interação estromal 2) codifica um sensor de Ca²⁺ do retículo endoplasmático que acopla a depleção das reservas luminais de cálcio à entrada de cálcio operada por estoque (SOCE) ao recrutar canais ORAI nas junções entre o RE e a membrana plasmática. Ao modular os sinais de cálcio no citosol, a Stim2 influencia o acoplamento excitação–transcrição, a sinalização sináptica e imune e programas transcricionais dependentes de cálcio, incluindo NFAT e outras vias responsivas ao estresse. Em humanos, a STIM2 tem sido associada a alterações da homeostase do cálcio em contextos neurodegenerativos e neuropsiquiátricos, e também é estudada em relação à ativação de células imunes e à regulação metabólica. Suas propriedades de sensoriamento basal em comparação com a STIM1 a tornam um ponto útil para dissecar valores de referência (set points) e a dinâmica da sinalização de cálcio em modelos fisiológicos e relevantes para doenças.

Stim2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STIM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stim2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STIM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STIM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stim2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STIM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stim2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stim2 em células tumorais com expressão de STIM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.