SSB-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408087-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SSB-1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SSB-1ダブルニカースプラスミド（h）およびSSB-1ダブルニカースプラスミド（h2）は、SPSB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SSB-1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408087-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SSB-1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-408087-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのSPSB1は、SPRYドメインを含むアダプタータンパク質であるSSB-1をコードしており、SOCSボックスを介して特定の基質をCullin-RING型ユビキチンリガーゼ複合体に結び付け、ユビキチン化とプロテアソームによる分解（ターンオーバー）を促進します。このE3リガーゼ関連の活性を通じて、SSB-1はサイトカインおよび自然免疫シグナル伝達を制御する経路におけるタンパク質安定性の調節に寄与し、JAK/STATに関連する応答の調整にも関与します。SPSB1は炎症性シグナル伝達やインターフェロン刺激遺伝子（ISG）プログラムの負の制御因子として研究されており、宿主防御におけるフィードバック制御を解析する上で有用な結節点（ノード）として位置付けられています。SPSB1の発現や機能の変化は、免疫の調節異常や炎症関連の表現型に影響し得るため、免疫細胞モデルや上皮細胞モデルにおける機序解析研究で重要です。
SSB-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SPSB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SPSB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SPSB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SPSB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。