SREBP-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400575-ACT

SREBF2 codifica per la sterol regulatory element-binding protein 2 (SREBP-2), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato tramite proteolisi in condizioni di bassa disponibilità di steroli, inducendo l’espressione di geni che controllano la biosintesi e l’assorbimento del colesterolo. In collaborazione con le proteine SCAP e INSIG, SREBP-2 regola la via del mevalonato e l’importazione di colesterolo mediata dal recettore LDL, coordinando l’omeostasi lipidica con lo stress del reticolo endoplasmatico e segnali metabolici. Un’alterata attività di SREBF2/SREBP-2 è stata implicata nella dislipidemia e in fenotipi legati alla sindrome metabolica, ed è stata anche associata a una riorganizzazione del metabolismo lipidico che sostiene la proliferazione e la segnalazione infiammatoria in contesti patologici. In quanto nodo centrale del sensing degli steroli e del controllo trascrizionale, SREBF2 è ampiamente studiato per il suo ruolo nella regolazione metabolica, nella composizione delle membrane e nel crosstalk con l’autofagia e le vie dell’immunità innata.

SREBP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SREBF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SREBP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SREBF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SREBF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SREBP-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SREBF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SREBP-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SREBP-2 nelle cellule tumorali con espressione di SREBF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.