Sprouty 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401087-ACT

SPRY2 codifica a proteína Sprouty 2, um inibidor conservado de retroalimentação da sinalização de receptores tirosina-quinase (RTK) que modula respostas induzidas por fatores de crescimento, como proliferação, diferenciação e migração. A Sprouty 2 atenua principalmente a via RAS–RAF–MEK–ERK/MAPK a jusante de FGFR, EGFR e outros RTKs ao influenciar interações entre adaptadores e efetores, moldando assim a intensidade e a duração do sinal. Por meio dessas funções, o SPRY2 contribui para a regulação de programas de desenvolvimento, da dinâmica epitélio–mesênquima e de respostas celulares ao estresse. Alterações na expressão ou na regulação de SPRY2 têm sido associadas à desregulação da atividade da via MAPK observada em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo redes de sinalização oncogênica e remodelamento tecidual aberrante.

Sprouty 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPRY2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sprouty 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPRY2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPRY2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sprouty 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPRY2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sprouty 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sprouty 2 em células tumorais com expressão de SPRY2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.