SPRN CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407259

概要

SPRNはプリオンタンパク質の“影”であるShadoo（シャドゥー）をコードしており、神経系に豊富に存在するGPI（グリコシルホスファチジルイノシトール）アンカー型膜タンパク質で、プリオン関連の生物学に関与すると考えられています。ShadooはPRNPファミリーのタンパク質と構造的・機能的特徴を共有し、タンパク質品質管理、膜マイクロドメインの組織化、細胞ストレス応答などの過程と関連しています。実験モデルでは、SPRN発現の変化がプリオン病への感受性や神経変性様の表現型と関連づけられており、プロテオスタシスや神経細胞の生存を制御する経路における重要性が示唆されています。SPRNを研究することで、プリオン様タンパク質ネットワークがシナプス維持や、ミスフォールドタンパク質ストレスに対する応答にどのように影響するかを明らかにする手がかりとなります。

SPRN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPRN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPRN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPRNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPRNタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPRNシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPRN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPRNの機能に不可欠なSPRNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPRNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPRN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPRN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPRN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPRN HDRプラスミド（h）および SPRN HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPRNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPRN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。