SPPL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-414174

概要

シグナルペプチドペプチダーゼ様3（SPPL3）は、分泌経路内でII型膜タンパク質を膜内で切断する、GxGDファミリーに属する膜内アスパラギン酸プロテアーゼである。タンパク質のエクトドメインシェディングに関与し、複数の基質のプロセシングを制御することで、ゴルジ体およびER関連の輸送、糖タンパク質の成熟、ならびに膜タンパク質の細胞表面提示に影響を及ぼす。SPPL3の活性は、糖転移酵素の量や局在を調節することによるN型糖鎖付加の制御と関連づけられており、プロテオスタシスや膜タンパク質の品質管理とのつながりが示されている。これらの過程の破綻は、免疫シグナル伝達、炎症、ならびにがんに伴う糖鎖修飾や細胞表面受容体機能の変化を研究する上で重要である。

SPPL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPPL3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPPL3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPPL3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPPL3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPPL3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPPL3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPPL3の機能に不可欠なSPPL3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPPL3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPPL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPPL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPPL3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPPL3 HDRプラスミド（h）および SPPL3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPPL3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPPL3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。