SPNS2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405481-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SPNS2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SPNS2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SPNS2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SPNS2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SPNS2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SPNS2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPNS2 (Spinster-Homolog 2) kodiert einen mehrfach die Membran durchspannenden Transporter, der den Export von Sphingosin-1-phosphat (S1P) vermittelt und dadurch extrazelluläre S1P-Gradienten formt, welche Zellmigration, vaskuläre Integrität und den Transport von Immunzellen regulieren. Durch die Kontrolle der S1P-Verfügbarkeit für die S1PR-Signalgebung ist SPNS2 mit dem Sphingolipidstoffwechsel und nachgeschalteten Signalwegen verknüpft, die die Funktion der endothelialen Barriere und den Austritt von Lymphozyten beeinflussen. Eine veränderte SPNS2-Aktivität wurde mit fehlregulierten Entzündungsreaktionen und vaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, und seine Rolle in der lipidvermittelten Signalübertragung macht es relevant für Studien zur Dynamik des Tumormikromilieus und zur Gewebehomöostase. Diese Eigenschaften machen SPNS2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen von Lipidtransport, rezeptorvermittelter Signalgebung und Zell-Zell-Kommunikation.
SPNS2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SPNS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SPNS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SPNS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SPNS2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.