SPAG17 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410482

Visão geral

SPAG17 codifica o antígeno associado ao esperma 17, um componente estrutural e regulatório do aparato axonemal que sustenta a função de cílios e flagelos móveis. Participa de processos baseados em microtúbulos e contribui para a mecânica de batimento impulsionada por dineína, necessária para uma motilidade celular eficaz e para a propulsão de fluidos através de epitélios. Na biologia humana, a expressão alterada ou a disrupção de SPAG17 está associada a defeitos na espermatogênese e na motilidade dos espermatozoides, sendo relevante também para fenótipos mais amplos relacionados a ciliopatias, envolvendo comprometimento da estrutura e da sinalização ciliar. Como proteína associada a cílios/flagelos, SPAG17 também é útil para investigar como a organização do citoesqueleto se relaciona com a dinâmica do ciclo celular e com programas de diferenciação específicos de tecidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SPAG17 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SPAG17 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SPAG17, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SPAG17 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SPAG17.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SPAG17 para a investigação da sinalização de SPAG17, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SPAG17 críticos para a função SPAG17
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SPAG17 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SPAG17 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SPAG17 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SPAG17. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SPAG17 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SPAG17 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SPAG17 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SPAG17 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.