Somatostatin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400280-ACT

L’SST umano codifica la somatostatina, un ormone peptidico ampiamente espresso nel sistema nervoso e nei tessuti endocrini che sopprime la secrezione dell’ormone della crescita, dell’insulina, del glucagone e di numerosi ormoni gastrointestinali. La somatostatina segnala principalmente attraverso i recettori della somatostatina accoppiati a proteine G (SSTR1–SSTR5), attivando l’inibizione dell’adenilil ciclasi mediata da Gi/o, la modulazione dei canali ionici e la regolazione a valle delle vie MAPK e PI3K, per modulare eccitabilità, secrezione e proliferazione cellulare. Nei contesti neuroendocrini e pancreatici, SST contribuisce al controllo paracrino del rilascio degli ormoni delle isole pancreatiche e alla segnalazione neuroendocrina responsiva allo stress. Un’alterata segnalazione della somatostatina è rilevante per lo studio dell’omeostasi metabolica, della differenziazione neuroendocrina e della biologia delle patologie guidate dagli ormoni, inclusi modelli di disfunzione delle isole pancreatiche e fenotipi di tumori neuroendocrini.

Somatostatin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SST senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Somatostatin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SST nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SST, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Somatostatin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SST nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Somatostatin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Somatostatin nelle cellule tumorali con espressione di SST silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.