SNX17 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403452-ACT

SNX17 (Sorting Nexin 17) ist ein endosomaler Adapter mit PX-Domäne, der an Phosphoinositide bindet und NPxY-Motive erkennt, um das endozytotische Recycling vielfältiger Membranproteine zu steuern. Über Wechselwirkungen mit Retriever-/CCC-Komplexen und Retromer-assoziierter Transportmaschinerie unterstützt SNX17 die Sortierung von Rezeptoren aus frühen Endosomen zurück zur Plasmamembran und prägt damit Signaloutput, Nährstoffaufnahme und die Zell‑Matrix‑Kommunikation. Durch die Regulation der Oberflächenverfügbarkeit von Frachtproteinen wie Mitgliedern der LDL‑Rezeptorfamilie und Integrinen beeinflusst SNX17 Signalwege, die mit Lipidhomöostase, Migration und Zytoskelettorganisation verknüpft sind. Eine fehlregulierte SNX17‑abhängige Trafficking‑Funktion wurde mit veränderter Rezeptorsignalgebung in Verbindung gebracht und in Kontexten wie metabolischen Phänotypen, Neurobiologie und krebsassoziiertem Zellverhalten untersucht.

SNX17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNX17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNX17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNX17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNX17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNX17-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNX17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNX17-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNX17-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNX17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.