Smad7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400251-ACT

SMAD7 は、阻害性 SMAD である Smad7 をコードしており、受容体による R-SMAD のリン酸化を妨げ、さらに受容体のダウンレギュレーションを促進することで、TGF-β および BMP シグナル伝達の主要な負の制御因子として機能します。SMAD 依存的な転写プログラムを調節することを通じて、Smad7 は上皮間葉転換、細胞外マトリックスのリモデリング、細胞周期制御、ならびに炎症性シグナル間のクロストークに影響を与えます。SMAD7 発現の変化は、さまざまな組織環境において、線維化応答の破綻、免疫恒常性の障害、異常な増殖制御と関連づけられています。これらの経路レベルのつながりにより、SMAD7 は TGF-β/BMP ネットワーク内のフィードバック制御と、その下流の転写出力を解明するための有用な標的となります。

Smad7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMAD7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Smad7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMAD7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMAD7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Smad7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMAD7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSmad7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMAD7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSmad7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。