Sm B/B′ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404311-ACT

SNRPB codifica a proteína central do spliceossoma Sm B/B′, um componente canônico do anel Sm que se monta em pequenos RNAs nucleares ricos em uridina para formar as snRNPs U1, U2, U4/U6 e U5. Por meio desses complexos, Sm B/B′ sustenta o splicing do pré‑mRNA, a biogênese do spliceossoma e programas mais amplos de processamento de RNA que moldam a diversidade de isoformas de transcritos e a homeostase da expressão gênica. A perturbação da fidelidade de splicing ligada ao SNRPB pode influenciar vias que regulam o controle do ciclo celular, respostas a danos no DNA e saídas transcricionais adaptativas ao estresse. Componentes do spliceossoma desregulados, incluindo proteínas Sm, são frequentemente investigados em contextos de assinaturas de splicing aberrantes e desequilíbrio de proteostase observados em múltiplos modelos celulares relevantes para doenças.

Sm B/B′ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNRPB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sm B/B′ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNRPB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNRPB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sm B/B′. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNRPB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sm B/B′ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sm B/B′ em células tumorais com expressão de SNRPB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.