SLMAP CRISPR Activation Plasmid (m): sc-429965-ACT

Slmap kodiert das sarcolemmale membranassoziierte Protein (SLMAP), ein tail-anchored Membranprotein, das an intrazellulären Membranen angereichert ist und dort zur Membranorganisation sowie zur Kopplung an das Zytoskelett beiträgt. In Maus-Zellen wurde SLMAP mit der membranständigen Gerüstbildung im Zusammenhang mit der Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, der Regulation des Membrantransports und der Koordination von Signalprozessen an spezialisierten Membrandomänen in Verbindung gebracht. Über diese Funktionen beeinflusst SLMAP die zelluläre Architektur und stressresponsive Signalwege, die die Muskel- und Herzphysiologie prägen. Eine veränderte SLMAP-Expression oder -Lokalisation wurde mit Phänotypen assoziiert, die für die Biologie von Kardiomyopathien und Arrhythmien relevant sind, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zu Membran-Mikrodomänen und zur Kommunikation zwischen Organellen unterstützt.

SLMAP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Slmap-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SLMAP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Slmap-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Slmap-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SLMAP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Slmap-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SLMAP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SLMAP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Slmap-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.