SLC35F2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406765-ACT

SLC35F2 (membro F2 da família 35 de transportadores de solutos) é um transportador humano de membrana multipasso implicado na captação celular e no manuseio intracelular de pequenas moléculas, com funções relatadas no tráfego de membranas e em processos de transporte de xenobióticos. Como membro da família SLC35, é estudado no contexto da biologia de transportadores, da sensibilidade celular a compostos específicos e de determinantes de exposição intracelular que influenciam vias de resposta ao estresse e de sobrevivência. A expressão alterada de SLC35F2 tem sido associada a fenótipos relacionados ao câncer em conjuntos de dados transcriptômicos e é frequentemente avaliada como um modulador funcional da resposta a fármacos e da vulnerabilidade metabólica em modelos de células tumorais. Essas características tornam o SLC35F2 um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização ligada ao transporte, aptidão celular e reprogramação de vias sob perturbação química ou genética.

SLC35F2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC35F2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLC35F2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC35F2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC35F2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLC35F2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC35F2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLC35F2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLC35F2 em células tumorais com expressão de SLC35F2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.