SLC35B4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413728-ACT

SLC35B4 codifica um transportador de açúcares nucleotídicos associado ao Golgi/RE que medeia a captação de UDP-xilose e UDP-N-acetilglucosamina para a via secretória, fornecendo substratos para reações de glicosilação. Ao regular a disponibilidade de açúcares nucleotídicos, o SLC35B4 influencia a montagem de glicanos em proteínas e lipídios, modulando o tráfego de membranas, a sinalização de receptores e as interações com a matriz extracelular. Alterações no transporte de açúcares nucleotídicos e nos estados de glicosilação a jusante estão associadas à adaptação metabólica e a respostas ao estresse, tornando o SLC35B4 um ponto útil para estudar o glicometabolismo e a homeostase da via secretória. Programas de glicosilação desregulados têm sido implicados na biologia do câncer e em fenótipos inflamatórios, o que sustenta a investigação do SLC35B4 em modelos celulares relevantes para doenças.

SLC35B4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC35B4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLC35B4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC35B4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC35B4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLC35B4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC35B4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLC35B4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLC35B4 em células tumorais com expressão de SLC35B4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.