Skp2 p45CRISPR激活质粒(h): sc-400534-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Skp2 p45 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Skp2 p45 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Skp2 p45 CRISPR 激活质粒 (h) 和 Skp2 p45 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 SKP2 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Skp2 p45: sc-74477，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Skp2 p45CRISPR激活质粒(h) | sc-400534-ACT | 20 µg | $397.00 |
SKP2 编码 F-box 蛋白 Skp2 p45，它是 SCF（SKP1–CUL1–F-box）E3 泛素连接酶复合体中负责底物识别的组分，调控关键细胞周期调控因子的蛋白酶体降解周转。Skp2 通过促进 CDKN1B/p27^Kip1 等靶蛋白以及其他生长抑制蛋白的泛素化，支持 G1/S 转换、DNA 复制能力建立以及协调一致的检查点应答。SKP2 的活性与 PI3K–AKT、RB–E2F 以及与 TGF-β 相关的信号程序相互衔接，共同塑造细胞增殖、衰老与应激适应。SKP2 表达或功能失调在多种与疾病相关的背景中与细胞周期控制异常和基因组不稳定性有关，因此常被视为研究致癌信号与蛋白稳态机制的一个关键节点。
Skp2 p45 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SKP2的表达。
Skp2 p45 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SKP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SKP2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Skp2 p45表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SKP2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Skp2 p45的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SKP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Skp2 p45通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。