SKIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407373

概要

INPP5Kは、一般にSKIPと呼ばれるイノシトールポリリン酸5-ホスファターゼKをコードしており、PtdIns(4,5)P₂および関連基質を脱リン酸化することで、細胞内のホスホイノシトールシグナル伝達を調節するホスホイノシチドホスファターゼです。膜上のホスホイノシチド組成を調整することにより、SKIPはアクチン細胞骨格の構築、膜輸送、ならびに局所的な脂質セカンドメッセンジャーに依存するPI3K/AKTなどの経路下流のシグナル伝達に影響を与えます。INPP5K活性の変化は、筋および神経発生における恒常性の破綻と関連づけられており、神経筋機能や細胞構造に影響する先天性疾患の研究において重要です。ホスホイノシチドは複数の細胞内コンパートメントと過程を協調させるため、SKIPは、ヒト細胞における膜—細胞骨格カップリングや、ホスファターゼによって制御されるシグナル動態を解析するうえで有用な結節点となります。

SKIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるINPP5K遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、INPP5K内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、INPP5Kのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SKIPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SKIPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、INPP5K欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SKIPの機能に不可欠なINPP5Kエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、INPP5Kゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SKIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSKIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、INPP5K遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SKIP HDRプラスミド（h）および SKIP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはINPP5Kホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のINPP5K標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。