SKIP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407373

Panoramica

INPP5K codifica l’inositolo polifosfato-5-fosfatasi K, comunemente nota come SKIP, una fosfatasi dei fosfoinositidi che regola la segnalazione cellulare dei fosfoinositoli defosforilando PtdIns(4,5)P₂ e substrati correlati. Modulando la composizione dei fosfoinositidi a livello delle membrane, SKIP influenza l’organizzazione del citoscheletro di actina, il traffico di membrana e la trasduzione del segnale a valle di vie come PI3K/AKT, che dipendono da secondi messaggeri lipidici localizzati. Un’alterazione dell’attività di INPP5K è stata collegata a perturbazioni dell’omeostasi muscolare e dello sviluppo neurologico, rendendola rilevante per lo studio di disturbi congeniti che colpiscono la funzione neuromuscolare e l’architettura cellulare. Poiché i fosfoinositidi coordinano molteplici compartimenti e processi, SKIP rappresenta un nodo utile per analizzare l’accoppiamento membrana–citoscheletro e le dinamiche di segnalazione controllate dalle fosfatasi nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SKIP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene INPP5K in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del INPP5K insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto INPP5K a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SKIP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di INPP5K per lo studio della segnalazione di SKIP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni INPP5K critici per la funzione di SKIP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di INPP5K per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SKIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SKIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus INPP5K. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SKIP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SKIP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia INPP5K per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio INPP5K definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.