Six2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422957

概要

Six2（SIX homeobox 2）は、胚発生の過程で細胞運命の決定を制御するホメオドメイン型転写因子であり、腎臓の器官形成やネフロン前駆細胞集団の維持において重要な役割を担う。WNT/β-カテニン、FGF、BMP などのシグナル伝達と連携する転写ネットワークの一部として機能し、前駆細胞の自己複製と分化のバランスを調節する。マウスモデルでは、Six2 活性の変化が腎形成（ネフロジェネシス）を乱し、腎・尿路系先天異常（CAKUT）につながることがあり、発生経路の研究における重要な遺伝子とされる。さらに Six2 は、腎および間葉系前駆細胞の系譜追跡や分化研究におけるマーカー／制御因子としても利用されている。

Six2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSix2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Six2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Six2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Six2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Six2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Six2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Six2の機能に不可欠なSix2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Six2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Six2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSix2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Six2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Six2 HDRプラスミド（m）および Six2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSix2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSix2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。