Siva CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403496-ACT

ヒトSIVA1は、アポトーシス促進性のアダプタータンパク質であるSivaをコードしており、もともとはTNF受容体ファミリーのメンバーとの相互作用を通じて同定され、細胞外の死のシグナルを細胞内シグナル伝達へとつなぐ分子として知られています。Sivaはアポトーシスおよび細胞ストレス応答の制御に関与し、NF-κB活性の調節や、ミトコンドリアの完全性およびカスパーゼ活性化に影響するシグナルの統合に役割を果たすことが報告されています。細胞運命決定や生存経路に作用することから、SIVA1の発現動態は、がん化（腫瘍化）に伴う変化、腫瘍抑制ネットワーク、免疫関連シグナル伝達といった文脈でしばしば解析対象となります。SIVA1／Siva活性の異常は、アポトーシス刺激に対する感受性の変化や、増殖およびDNA損傷応答の変容と関連づけられており、疾患関連モデルにおける機構的な結節点としての有用性を支持しています。

Siva CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIVA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Siva CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIVA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIVA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sivaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIVA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSiva依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIVA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSiva経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。