Siglec-9 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-406675-LAC

SIGLEC9 codifica a Siglec-9, uma lectina do tipo imunoglobulina ligante de ácido siálico com função inibitória, expressa predominantemente em neutrófilos, monócitos e em subpopulações de células NK. Por meio de sinalização dependente de ITIM e do recrutamento de fosfatases como SHP-1/2, a Siglec-9 atenua vias de receptores ativadores para modular a ativação de leucócitos, a produção de citocinas e as respostas citotóxicas no contexto de padrões moleculares associados ao próprio (“self”) que são sialilados. Essa regulação do tipo checkpoint influencia interações célula–célula, adesão e a resolução da inflamação em microambientes de mucosas e associados a tumores. A atividade desregulada de SIGLEC9 tem sido associada a alterações na vigilância imune inata e a fenótipos inflamatórios, sustentando seu estudo em mecanismos de evasão imune e na polarização funcional de células mieloides/NK.

As Partículas de Ativação Lentivirais Siglec-9 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SIGLEC9 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Siglec-9 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SIGLEC9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Siglec-9. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SIGLEC9 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.