Sialyltransferase 7A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406723-ACT

ST6GALNAC1 codifica a Sialiltransferase 7A humana, uma glicosiltransferase residente no complexo de Golgi que catalisa a sialilação α2,6 de resíduos de GalNAc em O-glicanos, ajudando a moldar padrões de glicosilação do tipo mucina na superfície celular e em proteínas secretadas. Ao controlar a exibição terminal de ácido siálico, influencia processos dependentes de glicanos, incluindo estabilidade proteica, interações receptor–ligante e sinalização mediada por lectinas na via secretória. A atividade alterada de ST6GALNAC1 pode mudar a composição de glicoepítopos sialilados e tem sido associada a alterações em contextos de adesão celular e reconhecimento imune, tornando-o relevante para estudos de glicosilação associada a tumores e de microambientes inflamatórios. Assim, este gene é frequentemente analisado em estudos em nível de vias sobre remodelamento da glicosilação, diferenciação epitelial e comunicação célula–matriz.

Sialyltransferase 7A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST6GALNAC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sialyltransferase 7A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST6GALNAC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST6GALNAC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sialyltransferase 7A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST6GALNAC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sialyltransferase 7A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sialyltransferase 7A em células tumorais com expressão de ST6GALNAC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.