SF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402334-ACT

NR5A1 codifica o fator esteroidogênico 1 (SF-1), um receptor nuclear órfão que atua como regulador transcricional mestre do desenvolvimento das adrenais e gônadas, da biossíntese de hormônios esteroides e da homeostase do eixo reprodutivo. O SF-1 coordena redes gênicas que controlam o transporte de colesterol e a expressão de enzimas esteroidogênicas, integrando sinais que moldam programas de diferenciação endócrina. Na biologia humana, alterações na atividade de NR5A1 estão associadas a distúrbios do desenvolvimento sexual, comprometimento da função gonadal e fenótipos de insuficiência adrenal, além de terem relevância na biologia de tumores endócrinos. Como o SF-1 modula a especificação de linhagem e circuitos transcricionais relacionados a hormônios, ele é amplamente utilizado para investigar decisões de destino celular endócrino, vias de esteroidogênese e dependências de cofatores de receptores nucleares.

SF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR5A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR5A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR5A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR5A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SF-1 em células tumorais com expressão de NR5A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.