Separase CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-404170-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- Separase CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- Separase CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- Separase CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 Separase CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 ESPL1 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 Separase Antibody (B-4): sc-390314
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
Separase CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-404170-ACT | 20 µg | $397.00 |
ESPL1은 시스테인 엔도펩티다아제인 세파라아제를 암호화하며, 세파라아제는 코헤신 복합체 구성요소를 절단함으로써 후기(anaphase)에 자매 염색분체 분리를 유도하여 유사분열과 감수분열 동안 정확한 염색체 분리를 가능하게 합니다. 세파라아제 활성은 APC/C 의존적 단백질분해에 의해 활성화되기 전까지 세큐린(securin) 결합과 억제성 인산화에 의해 엄격히 조절되며, 이를 통해 중기–후기 전환과 세포질분열의 완료가 정교하게 조율됩니다. ESPL1 발현 조절 이상 또는 세파라아제 과활성은 염색체 불안정성과 이수성을 촉진할 수 있어, 이 경로는 다양한 암 맥락에서 관찰되는 유전체 유지 결함과 연관됩니다. ESPL1은 또한 방추체 조립 체크포인트 조절, 세포주기 타이밍, 코헤신 결합/제거 역학을 연구하기 위한 기전적 핵심 노드로 활용됩니다.
Separase CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 ESPL1 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
Separase CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 ESPL1 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 ESPL1 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 Separase 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 ESPL1 위치를 보존하고 내인성 위치에서 Separase 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 ESPL1 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 Separase 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.