Particules Lentivirales d'Activation (h) SEMA3E: sc-404797-LAC

SEMA3E code la sémorine-3E, un signal de guidage sécrété qui agit principalement via les récepteurs plexines pour réguler le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire directionnelle et les interactions cellule–cellule. Dans les cellules humaines, SEMA3E influence le guidage axonal, l’organisation vasculaire et l’architecture épithéliale en modulant la signalisation des GTPases de la famille Rho et les voies en aval qui contrôlent l’adhésion et la motilité. Une signalisation SEMA3E dérégulée a été associée à des réponses angiogéniques altérées et à des phénotypes invasifs dans plusieurs contextes de cancer ; elle est également étudiée dans des processus de neurodéveloppement et d’inflammation. Ces propriétés font de SEMA3E une cible utile pour disséquer les mécanismes de signalisation du microenvironnement, les circuits de migration et les programmes de guidage médiés par les récepteurs.

Les particules d'activation lentivirales SEMA3E (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SEMA3E dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SEMA3E (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SEMA3E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SEMA3E. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SEMA3E ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.