Sec8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422866

概要

Exoc4は、SNARE依存的な融合に先立って、分泌小胞を特定の形質膜部位へ係留（テザリング）する役割を担う、8量体エキソシスト複合体の必須サブユニットであるSec8をコードします。マウス細胞においてSec8は、上皮の極性、神経突起の伸長、細胞質分裂、受容体リサイクリングなどの過程を支える極性エキソサイトーシスと膜輸送の調整に寄与し、Ral、Rab、Cdc42を含む低分子量GTPアーゼからのシグナルを統合します。エキソシスト機能は細胞骨格の再構築および指向性の細胞移動と密接に関連しているため、Sec8は組織形成や細胞内輸送の忠実性を制御する経路を研究するうえで有用な結節点となります。エキソシスト依存的な輸送の破綻は、細胞極性の変化やシグナル伝達ダイナミクスの異常と関連づけられており、発生学および神経生物学研究の観点からも重要です。

Sec8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるExoc4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Exoc4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Exoc4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sec8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sec8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Exoc4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sec8の機能に不可欠なExoc4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Exoc4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sec8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSec8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Exoc4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sec8 HDRプラスミド（m）および Sec8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはExoc4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のExoc4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。