SDHA Plasmide Double Nickase (m): sc-426283-NIC

Il gene murino **Sdha** codifica la subunità flavoproteica della succinato deidrogenasi (SDHA), un componente centrale del complesso mitocondriale II che collega il ciclo degli acidi tricarbossilici alla catena di trasporto degli elettroni catalizzando l’ossidazione del succinato a fumarato e convogliando gli elettroni verso l’ubichinone. Grazie a questo duplice ruolo, SDHA contribuisce a regolare la fosforilazione ossidativa, l’equilibrio redox mitocondriale e la bioenergetica cellulare, con effetti a valle sulle specie reattive dell’ossigeno e sulla segnalazione mediata dai metaboliti. L’alterazione della funzione del complesso II è ampiamente studiata nel contesto del rimodellamento metabolico, della segnalazione associata all’ipossia e delle risposte allo stress mitocondriale. Un’attività di SDHA modificata è rilevante anche in modelli di neurodegenerazione e di biologia tumorale, in cui si indagano la disfunzione mitocondriale e spostamenti metabolici simili a quelli indotti dagli oncometaboliti.

SDHA Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sdha nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sdha. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sdha. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sdha interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.