Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sclerostin: sc-401527-ACT

Le gène humain **SOST** code la sclérostine, une glycoprotéine sécrétée produite majoritairement par les ostéocytes, qui joue le rôle de régulateur extracellulaire clé de la formation osseuse. La sclérostine antagonise la signalisation canonique **Wnt/β-caténine** en se liant aux co‑récepteurs **LRP5/6**, limitant ainsi la différenciation des ostéoblastes, la minéralisation de la matrice et la dynamique du remodelage osseux. Par son rôle dans la modulation de la signalisation ostéoanabolique, **SOST** est impliqué dans l’homéostasie squelettique et dans des troubles caractérisés par une masse osseuse altérée, ainsi que dans des études plus larges portant sur la mécanotransduction et la communication ostéocyte–ostéoblaste.

Sclerostin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOST sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sclerostin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOST dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOST, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sclerostin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOST natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sclerostin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sclerostin dans les cellules tumorales présentant une expression de SOST silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.