SCG10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-422814-KO-2

Panoramica

Stmn2 codifica SCG10, un membro della famiglia delle stathmine arricchito nei neuroni, che si lega alla tubulina e favorisce la destabilizzazione dei microtubuli, sostenendo il rimodellamento dinamico del citoscheletro durante la crescita dei neuriti e la guida assonale nello sviluppo del sistema nervoso del topo. L’attività di SCG10 influenza il comportamento del cono di crescita, il traffico intracellulare e la plasticità dipendente dall’attività, collegando gli input di segnalazione al turnover dei microtubuli. La disregolazione di STMN2/SCG10 è stata associata a risposte neuronali allo stress e ad alterazioni del mantenimento assonale, rendendola rilevante per studi sulla neurodegenerazione e sulla vulnerabilità dei motoneuroni. Nei modelli cellulari, la perturbazione di SCG10 influisce sui programmi di differenziamento neuronale, sui fenotipi di rigenerazione assonale e sui processi sinaptici dipendenti dal citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SCG10 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stmn2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stmn2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stmn2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SCG10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stmn2 per lo studio della segnalazione di SCG10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stmn2 critici per la funzione di SCG10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stmn2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SCG10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SCG10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stmn2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SCG10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SCG10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stmn2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stmn2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.