SCCA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403601-ACT

SERPINB3 codifica o antígeno 1 do carcinoma de células escamosas (SCCA1), um inibidor intracelular de serino-proteases da família das serpinas que modula a proteostase dependente de proteases e as respostas ao estresse epitelial. O SCCA1 pode restringir a atividade de proteases do tipo catepsina e quimase, influenciando a integridade lisossomal, o processamento de antígenos e programas de sinalização apoptótica ou inflamatória em epitélios diferenciados. A expressão desregulada de SERPINB3 tem sido associada ao remodelamento epitelial e a fenótipos relacionados ao sistema imune observados em contextos de malignidades escamosas, o que o torna um marcador útil e um nó funcional para estudar inflamação associada a tumores e vias de sobrevivência celular. Em modelos celulares, a perturbação de SERPINB3 é comumente avaliada em conjunto com vias que regulam estresse oxidativo, sinalização por citocinas e diferenciação epitelial.

SCCA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SERPINB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCCA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SERPINB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SERPINB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCCA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SERPINB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCCA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCCA1 em células tumorais com expressão de SERPINB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.