Plasmide CRISPR/Cas9 KO SART-2 (h): sc-407069

Présentation

DSE code la dermatan‑sulfate épimérase, une enzyme résidente du RE/Golgi qui convertit l’acide D‑glucuronique en acide L‑iduronique dans les chaînes de chondroïtine/dermatane sulfate, contribuant ainsi à façonner la structure des protéoglycanes et les propriétés de la matrice extracellulaire (MEC). En modulant la composition des glycosaminoglycanes, DSE influence la fibrillogenèse du collagène, l’adhérence cellule–matrice et la disponibilité des facteurs de croissance, susceptibles d’affecter des programmes de signalisation tels que TGF‑β et d’autres voies sensibles à la MEC. Des altérations de la biosynthèse du dermatane sulfate ont été associées à des phénotypes du tissu conjonctif et à un remodelage stromal dérégulé, et la perturbation de DSE est étudiée dans des contextes incluant la fibrose et la biologie du microenvironnement tumoral. Le gène est également mentionné dans certaines publications sous le nom de protéine SART‑2, qui peut apparaître dans des études d’antigénicité et d’expression selon les conventions d’annotation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SART-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DSE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DSE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DSE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SART-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DSE pour l'étude de la signalisation de SART-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DSE essentiels à la fonction de SART-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DSE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SART-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SART-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DSE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SART-2 plasmide HDR (h) et le SART-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DSE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DSE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.